Otimização de protocolo de extração de DNA genômico para acácia-negra

Autores

DOI:

https://doi.org/10.30612/agrarian.v13i49.9190

Palavras-chave:

Acacia mearnsii. Ácidos nucleicos. CTAB. RNase.

Resumo

Considerando-se que a atual tendência do melhoramento florestal é a integração das técnicas clássicas com as de análise genética molecular, faz-se necessária a obtenção de protocolos de extração de DNA genômico ajustados a cada espécie estudada. O objetivo do trabalho foi determinar o efeito de diferentes adaptações no protocolo de extração de DNA genômico CTAB para acácia-negra. Foram testados diferentes componentes na fase de extração orgânica: clorofórmio, fenol e proteinase K, além da aplicação de RNase após a fase de precipitação e limpeza do DNA. Também, foi investigada a eficiência destes tratamentos em amostras de folíolos frescas ou armazenadas em baixa temperatura durante sete dias. Foi verificada a presença de DNA de todas as amostras submetidas à extração pelo protocolo de CTAB com os diferentes tratamentos. O tempo de armazenamento das amostras não influenciou na integridade do DNA, entretanto, foi possível observar que a adição de RNase melhorou a qualidade do DNA extraído. Deste modo, sugere-se a utilização do protocolo CTAB com uso de clorofórmio e RNase, com amostras frescas ou armazenadas em baixas temperaturas.

Downloads

Não há dados estatísticos.

Biografia do Autor

Yasmin Imparato Maximo, Universidade Federal do Paraná (UFPR)

Engenheira Florestal pela UFPR.

Angela Cristina Ikeda, Universidade Federal do Paraná (UFPR)

Doutora em Genética pela UFPR. Técnica do Laboratório de Biotecnologia Florestal da UFPR.

Paulo César Flôres Júnior, Universidade Federal do Paraná (UFPR)

Doutor em Engenharia Florestal pela UFPR.

Giovana Bomfim de Alcantara, Universidade Federal do Paraná (UFPR)

Doutora em Agronomia pela UFPR. Professora do Departamento de Ciências Florestais da UFPR.

Antonio Higa, Universidade Federal do Paraná (UFPR)

Doutor em Engenharia Florestal pela Australian National University. Professor do Programa de Pós-Graduação em Engenharia Florestal da UFPR.

Referências

AGEFLOR: ASSOCIAÇÃO GAÚCHA DE EMPRESAS FLORESTAIS. A indústria de base florestal no Rio Grande do Sul 2017: ano base 2016. Porto Alegre: AGEFLOR, 2017, 13p.

AUBAKIROVA, K.; OMASHEVA, M.; RYABUSHKINA, N.; TAZHIBAEV, T.; KAMPITOVA, G.; GALIAKPAROV, N. Evaluation of five protocols for DNA extraction from leaves of Malus sieversii, Vitis vinifera, and Armeniaca vulgaris. Genetics and Molecular Research, v.13, n.1, p.1278-1287, 2014.

BORÉM, A.; MIRANDA, G. V. Melhoramento de plantas. 6. ed.. Viçosa: UFV, 2013. 523p.

CAPELOTO, A.; UNÊDA-TREVISOLI, S. H.; ARRIEL, N. H. C.; QUEIROZ, M. A.; DI MAURO, A. O. Quali-quantitative analysis of genomic DNA extraction methods in watermelon. Revista Ceres, v.52, n.299, p.1-12, 2005.

CURY, P. R.; FURUSE, C.; ARAÚJO, N. S. Technique and application of polimerase chain reaction in dentristy. Revista Odontológica de Araçatuba, v.26, n.2, p. 34-39, 2005.

DOYLE, J. J.; DOYLE, J. L. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Phytochemical Bulletin, v.19, p.11-15, 1987.

FLÔRES JR, P. C. Caracterização morfológica e análise de divergência genética entre clones de acácia-negra (Acacia mearnsii De Wildeman). 2015. Ano de obtenção: 2015. 76 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Florestal) – Universidade Federal do Paraná, 2015.

IBÁ: INDÚSTRIA BRASILEIRA DE ÁRVORES. Relatório IBÁ 2016 ano base 2015. Brasília: IBÁ, 2016, 100p.

MAZZA, J. C. M.; BITTENCOURT, J. V. M. Extraction of DNA from plant tissue of Araucaria angustifolia (Araucariaceae). Boletim de Pesquisa Florestal, n.4, p.12-17, 2000.

OLIVEIRA, L. C.; RODRIGUES, D. P.; HOPKINS, M. J. G. Comparison of six DNA extraction protocols to molecular analysis in species of Fabaceae. Scientia Amazonia, v.6, n.3, p.38-45, 2017.

ROMANO, E.; BRASILEIRO, A. C. M. Extração de DNA de plantas. Biotecnologia, v.2, n.9, p.40-43, 1999.

SAHU, S. K.; THANGARAJ, M.; KATHIRESAN, K. DNA Extraction protocol for plants with high levels of secondary metabolites and polysaccharides without using liquid nitrogen and phenol. ISRN Molecular Biology, v.2012, p.1-6, 2012.

SILVA, A. Z. C. da; COSTA, R. B da; CAMPOS, D. T. da S. Comparison of three buffers for extraction of genomic DNA from leaf tissues of Eucalyptus camaldulensis Dehnh. Multitemas, n.48, p.179-193, 2015.

TABERLET, P.; COISSAC, E.; POMPANON, F.; GIELLY, L.; MIQUELL, C.; VALENTINI, A.; VERMAT, T.; CORTHIER, G.;BROCHMANN, C.; WILLERSLEV, E. Power and limitations of the chloroplast trnL (UAA) intron for plant DNA barcoding. Nucleic Acids Research, v.35, p.1-8, 2007.

Downloads

Publicado

2020-07-27

Como Citar

Maximo, Y. I., Ikeda, A. C., Flôres Júnior, P. C., Alcantara, G. B. de, & Higa, A. (2020). Otimização de protocolo de extração de DNA genômico para acácia-negra. Agrarian, 13(49), 323–329. https://doi.org/10.30612/agrarian.v13i49.9190

Edição

v. 13 n. 49 (2020)

Seção

Artigo - Fitotecnia

Licença

Autores que publicam nesta revista concordam com os seguintes termos:

  • Autores autorizam a publicação do texto na da revista;

  • É reservado aos editores o direito de realizar ajustes textuais e de adequação às normas da publicação;

  • A Agrarian não se responsabiliza pelas opiniões, ideias e conceitos emitidos nos textos, por serem de inteira responsabilidade de seus autores;

  • Autores garantem que a contribuição é original e inédita e que não está em processo de avaliação em outro periódico;

  • Autores mantém os direitos autorais e concedem à revista o direito de primeira publicação, com o trabalho simultaneamente licenciado sob a Atribuição-NãoComercial-CompartilhaIgual 3.0 Brasil (CC BY-NC-SA 3.0 BR) que permite: Compartilhar — copiar e redistribuir o material em qualquer suporte ou formato e Adaptar — remixar, transformar, e criar a partir do material. A CC BY-NC-SA 3.0 BR considera os termos seguintes:

  1. Atribuição — Você deve dar o crédito apropriado, prover um link para a licença e indicar se mudanças foram feitas. Você deve fazê-lo em qualquer circunstância razoável, mas de nenhuma maneira que sugira que o licenciante apoia você ou o seu uso.
  2. NãoComercial — Você não pode usar o material para fins comerciais.
  3. CompartilhaIgual — Se você remixar, transformar, ou criar a partir do material, tem de distribuir as suas contribuições sob a mesma licença que o original.
  4. Sem restrições adicionais — Você não pode aplicar termos jurídicos ou medidas de caráter tecnológico que restrinjam legalmente outros de fazerem algo que a licença permita.
  • Após a publicação, os autores têm permissão e são estimulados a publicar e distribuir seu trabalho online – em repositórios institucionais, página pessoal, rede social ou demais sites de divulgação científica, desde que a publicação não tenha fins comerciais.